mapeamento híbrido de radiação é um processo de engenharia genética , que foi originalmente desenvolvido para a construção de mapas de longo alcance de cromossomas de mamíferos e descobrir a localização de marcadores genéticos em relação um ao outro . Radiação mapeamento híbrido está enraizada em um modelo estatístico para medir as distâncias entre o ácido desoxirribonucleico ( DNA) marcadores e sua ordem nos cromossomas . Marcadores de ADN são muito curtos . Seqüências de DNA cíclicos estão contidos dentro de um genoma . Radiação mapeamento híbrido tem se mostrado indispensável para a localização de genes de doenças humanas no genoma. A localização relativa destes marcadores de DNA podem ser fundiram-se em um mapa físico conhecido como um mapa genético .
Passos de radiação técnica híbrida
O primeiro passo do híbrido de radiação técnica envolve a amplificação e purificação de ADN semelhante ao primeiro passo em qualquer projecto de sequenciação . A radiação é , em seguida, utilizada para dividir o ADN em pequenos segmentos e estes segmentos são então incorporados em uma célula híbrida . A célula híbrida radiação é então cultivada a ser cultivadas em grandes quantidades . Reacção em cadeia da polimerase ( PCR), e análise de ligação são utilizadas para resolver a distância entre os marcadores de ADN . Você pode facilmente verificar a presença de vários marcadores genéticos. Quanto mais próximos os dois marcadores genéticos são um para o outro , menor é a probabilidade de ser separados pela radiação DNA -splitting .
Procedimento /Técnica
o procedimento da técnica de híbrido de radiação envolve o uso de duas linhas de células diferentes que são incapazes de sobreviver em um meio tóxico . No entanto , elas contêm genes que podem resistir a mídia tóxico quando combinadas numa única célula ( devido à produção de uma enzima resistente à toxina ) . A linha celular em estudo é irradiada ( usualmente por Raios X ) , causando quebras no ADN . Isto faz com que o cromossoma de quebrar em vários segmentos , que são subsequentemente fundidas ou integrados com a outra linha de células , a produção de um híbrido . Desde o híbrido incorporou genes de ambas as linhagens celulares e pode produzir a enzima necessária , ela irá sobreviver na mídia tóxico.
Cultivo
A célula híbrida, que pode sobreviver agora é cultivado em grandes quantidades . Isto amplifica o DNA herdado a partir da linha de células irradiadas . A amostra resultante é então submetida a PCR para amplificar dois marcadores genéticos específicos . Ao executar os produtos de PCR sobre um gel , que pode ser verificado se ambos os marcadores que são incorporados na linha celular resultante . As freqüências com as quais marcadores de DNA são mantidas em cada clone (amostra cultivada ) pode ser calculada através de métodos estatísticos .
Aplicação
Os mapas gerados de cromossomos para as múltiplas espécies como seres humanos, ratos, camundongos e outros genomas facilitar a geração de mapas altamente detalhados e precisos utilizados para o estudo de doenças multifatoriais . Outras aplicações incluem a determinação de locais de cromossomos de 26 novos cDNAs completos humanos (DNA cromossômico ) .