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Métodos de Citometria de Fluxo essenciais

A citometria de fluxo envolve o princípio de focagem hidrodinâmica , usando uma fonte de luz de excitação tal como um laser , para medir e analisar as características físicas das partículas individuais . A citometria de fluxo é essencialmente aplicado à análise de células , e as propriedades analisadas incluem o tamanho da célula , granularidade e intensidade de fluorescência . Métodos de detecção essenciais utilizados no fluxo incluem citometria forward- dispersa luz, luz dispersa - lateral e de fluorescência. Citômetro de fluxo

um citômetro de fluxo é composta de fluidos , óptica e um sistema de eletrônica. O sistema de fluidos é responsável pelo transporte da corrente de amostras, para o feixe de laser para a interrogação . O sistema óptico contém lasers e filtros ópticos que iluminam amostras e sinais de luz direta para os detectores relevantes. Esta luz detectada é convertida em sinais eletrônicos pelo sistema eletrônico, para a interpretação pelo computador.
Forward- Luz dispersada

luz difratada espalhados para a frente é detectada cerca de 20 graus em relação ao eixo do feixe de laser por um fotodiodo , denominado canal dispersa - frontal (FSC ) . Adiante luz dispersa é directamente proporcional à área de superfície de partícula , e é utilizado como um indicador de tamanho de célula e de distinguir entre células vivas e mortas . Devido a estas características , o FSC é aplicada a imunofenotipagem como um gatilho de processamento de sinais.
Side Luz dispersada

luz Side- espalhadas refere-se a luz refratada em qualquer interface celular , que é medido em cerca de 90 graus a partir do eixo do feixe de laser através do canal lateral de dispersão (CCD ) , seguida redireccionada para o detector relevante por um divisor de feixe . Luz dispersa - lateral é aproximadamente equivalente a granularidade da célula ou complexidade interna , e é usado para determinar o conteúdo granular de células . Side e luz para a frente - espalhados são usados ​​em combinação para distinguir entre diferentes tipos de células.
Fluorescência

fluorescência fornece informações quantitativas e qualitativas sobre as moléculas intracelulares , tais como citocinas e de DNA, e os receptores de superfície celular , utilizando rótulos fluorocromos e medir em diferentes comprimentos de onda. Cada etiqueta fluorocromo tem um comprimento de onda específico tocou no qual a luz é absorvida chamado o espectro de absorção . Funções de fluorescência como um fóton de luz é emitida por um elétron animado subseqüente à absorção da luz.