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PCR Basics

Polymerase Chain Reaction ( PCR ) é um método de replicação do ADN . O método tem o nome de polimerase de ADN , uma enzima utilizada para catalisar o processo de replicação do ADN . Kary Mullis desenvolveu a técnica em 1984 e foi agraciado com o Prêmio Nobel de Química por seu trabalho em 1993. Aplicações da PCR

aplicações comuns de PCR incluir impressões digitais de DNA ( em que fragmentos de DNA são isoladas e comparado com dados existentes ) , a análise de quantidades extremamente pequenas amostras (que permite aos cientistas para reconstruir organismos extintos e figuras históricas falecidos ) e diagnóstico da doença (incluindo DNA viral e pesquisa do câncer ) .

Componentes PCR

componentes necessários e reagentes de uma reacção de PCR são: DNA genômico ( o modelo para replicar ); dois primers (um à frente e uma reversa ) gratuito para a seqüência de modelo de DNA; um cocktail de reacção ( incluindo a polimerase Taq e uma solução tampão que proporciona um ambiente viável em que a reacção irá ocorrer ); eo substrato para a enzima Taq ( nucleotídeos que ajudarão a "construir" os fios individuais ) .

Passos de PCR

Os passos da reação são : desnaturação ( durante o qual a temperatura é elevada para separar as cadeias do molde de ADN ); O recozimento do iniciador ( durante o qual a temperatura é arrefecida para encorajar as sequências de iniciadores de flutuação livre para aderir ao molde de ADN isoladas fios ); e Extensão (durante as quais a polimerase Taq adere à cartilha e usa nucleotídeos flutuantes para replicar cada isolado modelo fita de DNA ) . Repetindo este processo várias vezes irá isolar cada seqüência replicado a partir do seu modelo de DNA original . Cada repetição aumenta exponencialmente a quantidade de ADN replicado até que haja uma quantidade suficiente para o ensaio desejado . Para a temperatura ideal e outras condições , consulte "Programas de PCR Projetando " da Universidade de Yale em Recursos , abaixo.

Estágios de PCR

A reação também pode ser descrita em três fases : Amplificação ( durante o qual o DNA é replicado de forma exponencial ); Nível -Off (durante as quais a polimerase Taq perde atividade ); e planalto ( em que não há mais tempo o produto pode ser produzido na reacção em curso) . Para uma demonstração interativa da reação de PCR , consulte Universidade de "Laboratório Virtual PCR " de Utah em Recursos , abaixo.