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Procedimentos de marcação de anticorpos

procedimentos de marcação de anticorpos são as técnicas utilizadas nas ciências biológicas para detectar a presença de moléculas específicas . Estes processos fazem uso da relação entre um antigénio e o anticorpo . Antigénios podem ser qualquer molécula que o sistema imunitário reconhece . Um anticorpo é uma proteína em forma de Y, que reconhece especificamente um único antigénio . Os biólogos utilizar a relação de ligação entre o anticorpo e o antigénio para determinar a localização de uma molécula específica numa amostra . ELISA

ELISA , ou ligada ao ensaio imunoenzimático , é uma técnica de laboratório biológico usado para detectar a presença de um antigénio ou anticorpo . Ele é frequentemente utilizado no diagnóstico médico para determinar se um paciente foi exposto a um determinado tipo de infecção .

Para realizar um ensaio ELISA , o — amostra contendo o antigénio de interesse — é ancorado a um suporte sólido num prato . Uma solução com o anticorpo complementar é adicionado à cápsula, e o anticorpo liga-se ao antigénio . O excesso de anticorpo é então lavado, deixando apenas os pares de antígeno - anticorpo ligada no prato . Estas podem ser visualizadas por adição de uma molécula fluorescente que se liga ao anticorpo e emite um sinal visual , o que pode, então, ser quantificada . Deste modo , a presença e quantidade de antigénio de interesse pode ser determinada indirectamente .
Western Blot

Um Western blot é um tipo diferente de técnica utilizada para detectar uma proteína específica em uma amostra e determinar o seu tamanho . Primeiro , as proteínas da amostra são espalhados por tamanho sobre um gel usando electroforese em gel . Neste ponto , as proteínas não são visíveis a olho nu . Os cientistas então transferir as proteínas para uma membrana e adicionar uma solução contendo o anticorpo para o antigénio de interesse . Após a lavagem para retirar o excesso de solução , o anticorpo é ligado ao antigénio sobre a membrana .

Adicionando um anticorpo secundário provoca o original , ou primária , anticorpo para emitir luz . Quantificar a quantidade de luz emitida permite aos pesquisadores determinar a presença do antígeno , seu tamanho em comparação com outras proteínas e sua concentração relativa.
Imunohistoquímica

Imunohistoquímica é uma técnica que permite que os pesquisadores para visualizar a localização de uma proteína numa amostra de tecido . Pequenos pedaços de uma amostra são preparados e de um anticorpo primário , o qual se liga ao antigénio de interesse , é adicionado . O excesso de solução é lavado antes de pesquisadores adicionam um anticorpo secundário . Este anticorpo liga ao par anticorpo - antigénio primário e emite luz , sinalizando a localização do antigénio de interesse .

Cientistas usar um microscópio para visualizar onde o antigénio é na célula . Vários anticorpos diferentes , cada um específico para uma determinada proteína , pode ser usado para determinar a posição relativa de várias moléculas na célula . Se esse é o objetivo, anticorpos secundários de cores diferentes são usadas para distinguir entre as diferentes moléculas de interesse .
Citometria de Fluxo

— classificação célula de fluorescência - ativado ou FACS — é um tipo de citometria de fluxo para separar os diferentes tipos de células em solução . Cada tipo diferente de célula é "marcado " com um anticorpo específico para aquele tipo de célula . Cada um destes anticorpos emite uma cor diferente da luz . Uma máquina agita a solução a dividi-la em gotas individuais e utiliza um sensor para detectar a cor de cada gota . A máquina classifica as células por cor emitida , dividindo-os com base no tipo de proteína que contêm . Metodologia FACS permite aos pesquisadores classificar e quantificar as células de interesse para suas perguntas de pesquisa .
Imuno- Microscopia Eletrônica

microscopia eletrônica normal permite aos cientistas para examinar a estrutura de uma célula ampliado até 1 milhão de vezes. Microscopia de imuno - electrão utiliza as propriedades de ligação de anticorpo - antigénio para visualizar as proteínas específicas em secções de tecido muito fino . Primeiro , os anticorpos ligados com partículas de ouro são deixados a ligar -se ao antigénio de interesse . Um microscópio de electrões , em seguida, visualiza as partículas de ouro , dando uma imagem de investigadores que a proteína está localizada na célula .

Embora microscopia imuno - electrão é simples em teoria , é tecnicamente difícil e muito caro para empregar , limitando sua popularidade de uso em muitos programas de pesquisa biológica .