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NBT Ensaio Protocolos

NBT ou nitro tetrazólio azul é um composto químico utilizado em bioquímica e imunologia para a detecção da enzima fosfatase alcalina . A substância é também usada no teste de diagnóstico da doença granulomatosa crónica , que afecta as células immunodefense . Protocolos de ensaio NBT incluem imunotransferência , solução de substrato de fosfatase alcalina BCIP /NBT e a detecção de galactosidase e actividades de fosfatase alcalina no tecido . Immunoblotting

Immunoblotting é uma técnica usada para detectar anticorpos , que são proteínas envolvidas no processo de immunodefense , diz Susan R. Haynes em " Protocolos de Interação RNA em proteínas . " Isto inclui o uso de NBT , assim como albumina de soro de bovino , os anticorpos primários 9E10 , solução de coloração de Comassie , membranas de nitrocelulose , uma solução tampão de Tris base , de amónio , sulfato de dodecil - sulfato de sódio por e butanol saturado com água .

BCIP /NBT de fosfatase alcalina da solução de substrato

Técnicos preparar uma solução com três gotas de 1 por cento de fosfato de 5 -bromo - 4 - cloro - 3 - indolilo ( BCIP ) , três gotas de 1,5 por cento NBT , duas gotas da substância química Levamisol e fosfatase alcalina tampão ( AP) em pH 9,5 , de acordo com o site do IHC Mundial. A solução é , em seguida, incubadas à temperatura ambiente e estão disponíveis para uso.
Detecção de galactosidase e fosfatase alcalina Actividades em Tissue

galactosidases são enzimas que podem quebrar o molécula galactósido , presente na bactéria Escherichia coli e de outros organismos . De acordo com o Protocolo online, durante este protocolo , os biólogos utilizam amostras de células de ratos tratados com solução PBS , glutaraldeído e paraformaldyde . Em seguida , preparam o tampão de reacção de bromo - cloro - indolilo - galactopiranosido ou X - gal para as amostras , utilizando ferrocianeto de potássio , cloreto de magnésio , o desoxicolato de sódio e o detergente Nonidet P - 40 . Os técnicos podem usar nitro azul de tetrazólio ( NBT ) em vez de ferrocianeto de potássio como uma alternativa mais rápida . Amostras de células são posteriormente observadas ao microscópio .