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Qual é a melhor maneira de determinar quando a solução de leite fica clara no experimento com tripsina?

Determinar o ponto final de um experimento de hidrólise de tripsina caseína observando quando a solução fica límpida pode ser subjetivo e impreciso. Um método mais quantitativo e preciso é usar espectrofotômetro para medir a absorvância da solução em um comprimento de onda específico.

Aqui está um procedimento aprimorado para determinar o ponto final do experimento com tripsina usando um espectrofotômetro:

Materiais:

- Solução de tripsina
- Solução de substrato de caseína
- Solução de hidróxido de sódio (NaOH) (0,1 M)
- Espectrofotômetro
- Cubetas

Procedimento:

1. Prepare a mistura de reação:
- Em uma cubeta, misture um volume específico de solução de substrato de caseína (por exemplo, 1 mL) com um volume apropriado de solução de tripsina (por exemplo, 0,1 mL).
- Incubar a mistura a uma temperatura adequada (por exemplo, 37°C) durante o tempo desejado (por exemplo, vários minutos).

2. Pare a reação:
- Em intervalos de tempo específicos (por exemplo, a cada minuto), retire um pequeno volume da mistura reacional (por exemplo, 0,1 mL) e transfira-o para uma cubeta separada.
- Adicione imediatamente um volume suficiente de solução de hidróxido de sódio (por exemplo, 1 mL) para interromper a reação.

3. Medir Absorvância:
- Use o espectrofotômetro para medir a absorvância de cada mistura de reação interrompida em um comprimento de onda específico (por exemplo, 440 nm).

4. Planeje a Absorvância:
- Trace um gráfico com tempo (eixo x) e absorvância (eixo y).

5. Determine o ponto final:
- Analise os valores de absorção ao longo do tempo. O ponto final é o ponto no tempo em que a absorvância atinge um patamar ou mostra uma diminuição significativa, indicando a extensa hidrólise da caseína.

Este método fornece uma determinação mais objetiva e quantitativa do ponto final em comparação com a observação visual da clarificação da solução, uma vez que se baseia na medição da alteração na absorvância devido à libertação de péptidos e aminoácidos mais pequenos durante a hidrólise da caseína.