O primeiro componente adicionado a um laboratório de coloração de Gram é a mancha principal . Esta mancha é tipicamente algum tipo de corante violeta , tais como cristais , metilo ou violeta Genetian . O objectivo do presente corante está a alterar a cor das células das bactérias . No entanto , esse componente não é usado por si só. Após este componente é adicionado às células , o segundo componente deve também ser adicionada antes de fazer observações preliminares . Sem o segundo componente , o corante é menos provável para colorir as células .
Iodo
Ao mesmo tempo, o corante é adicionado às células , o técnico de laboratório também adiciona iodo à mistura. O iodo funciona com o corante violeta para criar uma retenção mais forte em células que conservam o cor . Nesta fase do ensaio , todas as células irão adquirir a cor púrpura - castanho da mistura de violeta - iodo . Neste ponto , há pouca diferenciação entre um teste que é positivo contra um que é negativo.
Álcool etílico ou acetona
Depois que as células foram tingida com a combinação de corante de violeta e iodo , álcool etyhl , acetona ou uma combinação dos dois são adicionados a descorar as células . Em células que são negativas , a solução de descoloração dissolve a camada de gordura exterior das células . Uma vez que apenas a camada exterior de todas as células absorve o corante , as células são lavadas negativos livre da cor com esta solução . No entanto , as células Gram-positivas manter sua cor roxo-marrom porque a solução desidrata as células , fechando os poros através dos quais o corante pode escapar .
Contracoloração
diferentes laboratórios usam diferentes tipos de contracoloração como o último componente de um teste de coloração de Gram . Alguns laboratórios usar fucsina , enquanto outros usam safranina vez . No entanto, a fucsina cria uma cor mais escura , mais facilmente visto e é muitas vezes preferido . O objectivo deste segundo corante é transformar as células negativas para um cor -de-rosa , em vez do castanho- púrpura do corante violeta e combinação de iodo . Isto ajuda o técnico de laboratório para ver claramente as diferenças entre os dois tipos de células . Uma vez que o técnico de laboratório administra o contrastante , ele pode diferenciar entre as duas células , bem como ver a forma e tamanho claramente .