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Lise celular Protocolo para isolamento de proteínas

proteínas pequenas podem ser preparadas sinteticamente , mas por muitas razões, não há nenhuma maquinaria de síntese melhor do que a própria célula . Tipicamente , o primeiro passo no isolamento de proteínas é a lise celular . Lise celular
Em lise celular , a membrana que envolve a ruptura de células .

A palavra " lise " vem de uma raiz grega que significa " afrouxar ". Em lise celular , as forças que mantêm a membrana celular em conjunto são interrompidas , causando a sua ruptura. O conteúdo da célula é então libertado para a solução envolvente, incluindo a proteína de interesse . Geralmente isso é feito por meio da adição de uma solução tampão de lise química chamada .
Preparar tampão de lise
A escolha do tampão de lise dependerão do tipo de célula , a proteína e a aplicação .

Uma miríade de soluções de lise diferentes estão disponíveis comercialmente , ou receitas comuns podem ser utilizados para preparar a tampão de lise a partir de produtos químicos comuns . O melhor tampão para utilizar irá variar dependendo do tipo de célula utilizada , a proteína a ser isolada e na aplicação final , mas , em geral , uma solução de lise contém uma molécula de detergente ( frequentemente NP - 40 ou Triton - X ) que se dissolve a célula membrana , além de amortecedores, quelantes e os inibidores da protease para evitar que a proteína seja danificado uma vez liberados do ambiente de proteção da célula

lise Condições
atuando sob lise . condições geladas evita danos à proteína de interesse. tampão de lise

é geralmente usado em gelo , e o processo de lise é deixada prosseguir sob condições de frio . A solução é suavemente agitada para encorajar a dispersão uniforme das células e produtos de lise . Depois de cerca de 5 a 10 minutos, a solução de lise é normalmente neutralizada a evitar ainda mais a actividade . Estas precauções reduzir os danos para a proteína e reduzir a quantidade de partículas estranhas que irão mais tarde produzida tem que ser removido .
Outros métodos de lise
força mecânica também pode ser utilizado para lisar as células .

Embora lise química é mais suave e mais comumente utilizada, os métodos mecânicos mais severas para lise das células pode ser usada em alguns casos . Estes incluem ultra-sons, os ciclos de congelamento e descongelamento repetidos e de homogeneização , que é um processo de maceração . Consulte a literatura técnica para encontrar o método mais adequado para o seu caso específico.